當前位置：首頁 > 一步法ELISA試劑盒 > 大鼠ELISA試劑盒> 科研 大鼠酶鉤端螺旋體IgM抗體(Leptospira IgM)定性檢測試劑盒
| 反應種屬 | 大鼠 |
| 檢測范圍 | 判定陰陽性 |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。 |
| 用途 | 用于定性檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中大鼠酶鉤端螺旋體IgM抗體（Leptospira IgM）。 |
| 實驗原理 | 試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠酶鉤端螺旋體IgM抗體（Leptospira IgM）捕獲抗原的包被微孔中，依次加入標本、陰性和陽性對照，再加入HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠酶鉤端螺旋體IgM抗體（Leptospira IgM）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），判定陰陽性。 |
| 特異性 | / |
| 重復性 | 板內變異系數小于15%。 |
| 回收率 | / |
| 試驗所需自備試驗器材 | 1、酶標儀（450nm） 2、高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3、37℃恒溫箱 4、蒸餾水或去離子水 |
| 操作程序 | 1、從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。 2、設置陰性對照孔、陽性對照孔和樣本孔，陰性、陽性對照孔各加 50μL 對照品，樣本孔中加入待測樣本 50μL，空白孔不加。 3、除空白孔外，對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。 4、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。 5、每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。 6、每孔加入終止液 50μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。 |
| 注意事項 | 1、嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。 2、洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。 3、消除板底殘留的液體和手指印，否則影響 OD 值。 4、底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。 5、避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。 6、在儲存和溫育時避免強光直接照射。 7、平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。 8、任何反應試劑不能接觸漂白 |
| 問題分析 | ①問題描述：標準曲線差 可能原因及相應對策： 1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問題描述：精密度低 可能原因及相應對策： 1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問題描述：O.D值低 可能原因及相應對策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現來檢查 5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液 6.超出讀數時間讀數——在說明書推薦的讀數時間內讀數 ④問題描述：樣本值 可能原因及相應對策： 1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進行實驗 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實驗 |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產生的問題負責，亦不承擔任何法律責任。 |
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