當前位置：首頁 > ELISA特殊高敏試劑盒> 科研 人艾滋病毒1+2抗體(HIV1+2Ab)檢測試劑盒
| 反應種屬 | 人 |
| 檢測范圍 | 判定陰陽性 |
| 物理性能 | 各液體組分澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。 |
| 用途 | 僅供科研使用，定性檢測血清、血漿、細胞培養上清液中人艾滋病毒 1+2 抗體(HIV1+2Ab)。 |
| 實驗原理 | 本試劑盒采用間接兩步法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被人艾滋病毒 1+2抗體(HIV1+2Ab)捕獲抗原（固相抗原）的微孔酶標板中，加入陰陽性對照和待測樣本，經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，再加入 HRP 標記的檢測抗體（酶標抗體），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標抗體的夾心復合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產生藍色產物，在終止液作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀上測定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）與待測樣品中待測抗體的濃度呈正相關，根據閾值判斷陰陽性。 |
| 特異性 | / |
| 重復性 | / |
| 回收率 | / |
| 試驗所需自備試驗器材 | 1.標準規格酶標儀。 2.自動洗板機。 3.振蕩器。 4.系列可調節移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，最好用多通道移液器。 |
| 操作程序 | 1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，陰陽性對照和樣品，建議做復孔。 2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 4、設置陰陽性對照、樣本孔和空白孔，陰陽性對照孔各加陰陽性對照 50μL，樣本孔加適當稀釋后的待測樣本 50μL，空白孔不加，用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。 5、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。 6、除空白孔外，陰陽性對照孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體 100μL。 7、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育 30min。 8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。 9、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光溫育 15min。 10、所有孔加入終止液 50μL，在 450nm 酶標儀上讀取各孔吸光度（OD 值）。 |
| 注意事項 | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒有被污染。 2：酶標板單次未使用完，要謹記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問題分析 | ①問題描述：標準曲線差 可能原因及相應對策： 1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問題描述：精密度低 可能原因及相應對策： 1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問題描述：O.D值低 可能原因及相應對策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現來檢查 5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液 6.超出讀數時間讀數——在說明書推薦的讀數時間內讀數 ④問題描述：樣本值 可能原因及相應對策： 1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進行實驗 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實驗 |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產生的問題負責，亦不承擔任何法律責任。 |
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